水貂李氏桿菌的分離鑒定、生化試驗、藥敏實驗、毒力試驗——結果、討論
2結果與分析
2.1細菌鏡檢與培養(yǎng)結果
病死水貂解剖，可見肺臟肉變、脾臟腫大、肝臟土黃色、腦水腫，心血、肝臟、肺臟、腦組織觸片，火焰固定，革蘭氏染色呈現陽性桿菌，肺臟未發(fā)現，心血、肝視野中少量幾個菌，腦組織視野中多處可見，菌體呈現規(guī)則短桿狀，多數散在，個別呈現V形。接種平板37℃溫箱培養(yǎng)24h可見，麥康凱瓊脂平板、SS瓊脂平板不生長，營養(yǎng)瓊脂平板生長少量，10%血清營養(yǎng)瓊脂平板、10%兔鮮血瓊脂平板生長良好，多量較小、圓形、光滑的菌落，鮮血瓊脂可見明顯的溶血環(huán)。
2.2細菌的生化結果
分離細菌接種生化反應管第3天觀察記錄結果，留樣繼續(xù)觀察至第7天，可見發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、果糖、鼠李糖、海藻糖、糊精、水楊苷、蔗糖、乳糖，結果呈現陽性，不發(fā)酵阿拉伯糖、棉實糖、衛(wèi)矛醇、木糖，呈現陰性。甲基紅MR和VP試驗均為陽性，具體結果見表1。
表1分離菌生化鑒定結果
注：“—”表示陰性，“+”表示陽性
2.3細菌的分子生物學鑒定結果
將PCR產物送測序公司測序，根據測序公司返回的測序結果，采用Bioedit軟件進行人工校對，然后輸入基因庫用Blastn軟件進行相似性比較，比較后構建系統(tǒng)發(fā)育樹，與產單核細胞李斯特菌相似性為99%，確定為李氏桿菌。
2.4病料PCR檢測結果
無菌取肝、脾臟、腦組織研磨，進行基因擴增，檢測腺病毒、狂犬病毒、偽狂犬病毒基因全部為陰性，排除腺病毒、狂犬病毒，偽狂犬病引起的神經癥狀。
2.5犬瘟熱試紙檢測結果
病料滴于檢測孔，觀察試紙結果，C為對照紅色成立，T線無色，犬瘟熱抗原陰性。
2.6細菌的藥敏試驗結果
使用微生物快速藥敏監(jiān)測系統(tǒng)進行藥敏試驗，37℃溫箱培養(yǎng)24h后觀察可見壯觀霉素、阿奇霉素、丁胺卡那霉素高敏，頭孢喹肟、頭孢噻呋、頭孢曲松、左氧氟沙星、多黏菌素中敏，環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強力霉素、林可霉素低敏。使具體藥敏結果見表2。
表2分離菌的藥敏結果(mm)
2.7毒力試驗結果
小白鼠腹腔注射菌液后2~3d死亡，呈現敗血癥，對照組觀察7d，健活；家兔眼結膜接種后，第2天開始發(fā)生化膿性的結膜炎，對照組觀察7d正常；水貂肌肉注射后第2~3天死亡，死亡前神經癥狀，對照組觀察7d，健活。所有發(fā)病死亡小白鼠、家兔、水貂進行解剖，細菌分離，可以分離到攻毒相同的李氏桿菌，鏡檢革蘭氏染色陽性小桿菌，有的呈現V形，在血清平板37℃溫箱培養(yǎng)24h后觀察可見透明露珠樣的菌落，鮮血平板可見明顯的溶血環(huán)。
3討論
3.1李氏桿菌的癥狀
李氏桿菌是人和多種禽、畜、野生動物共患的人獸共患病，在動物防疫和人的食品安全上都有重要的意義，不同動物有不同的臨床表現形式，需要區(qū)別診斷，主要的臨床特征是流產、神經癥狀、敗血癥，單胃和新生動家畜是敗血癥，反芻獸草食動物是腦炎、流產、結膜炎，嚙齒類動物主要是敗血癥，豬表現敗血癥、流產、神經癥狀等多種癥狀，毛皮動物發(fā)病主要是神經癥狀，水貂發(fā)生李氏桿菌病，主要是神經癥狀。
3.3水貂李氏桿菌病的鑒別診斷
臨床上水貂發(fā)生神經癥狀的疾病比較多，需要鑒別診斷，特別是發(fā)生在斷奶后仔貂，其中維生素A缺乏、維生素B1缺乏、缺鈣、神經性犬瘟熱、偽狂犬病、狂犬病、腺病毒感染、鏈球菌病等都有不同程度的神經癥狀。維生素A缺乏、維生素B1缺乏屬于維生素缺乏，主要表現神經癥狀，一般不死亡，或者發(fā)病很長時間才死亡；缺鈣的主要癥狀是癱瘓，生長較快的水貂表現明顯，其他食欲、精神不受影響，不會引起死亡；神經性犬瘟熱發(fā)病主要是發(fā)病后期的犬瘟熱，開始會有發(fā)熱、結膜炎等癥狀；偽狂犬病、狂犬病、腺病毒感染都是病毒性疾病，診斷需要病毒檢測，一般這幾種病毒病，發(fā)病都較少，但是需要從流行病學和實驗室診斷結合才能區(qū)別診斷；鏈球菌會引起的神經癥狀，也會引起敗血癥死亡，需要實驗室的細菌分離鑒別診斷。實驗室進行李氏桿菌診斷，鏡檢明顯的是革蘭氏陽性小桿菌，常見的致病性革蘭氏陽性小桿菌還有丹毒桿菌，需要區(qū)別診斷，不能僅僅通過鏡檢革蘭氏陽性確診。
3.3李氏桿菌的防治
李氏桿菌病可以發(fā)生在多種動物上，各種環(huán)境都是李氏桿菌生長繁殖的場所，水貂飼料主要是各種肉食，有的養(yǎng)殖場飼喂病死動物、有的飼料品質不良或者被污染都會引發(fā)該病的發(fā)生。李氏桿菌的生長條件比較特殊，在1~45℃都可以生長，就是說放在冷藏的肉食若有李氏桿菌感染，細菌是一直生長的，這也是造成冷藏條件下引起食物中毒一個原因。李氏桿菌發(fā)病一般都是散發(fā)，平時注意的比較少，隨著養(yǎng)殖場發(fā)病的增多，需要特別的注意預防。減少水貂養(yǎng)殖場李氏桿菌病的發(fā)生，禁止飼喂來源不明的病死動物，植物性飼料保存得當，特別注意滅鼠，老鼠會傳播李氏桿菌。發(fā)生疾病需要及時鑒別診斷，確診后及時使用抗生素預防治療，發(fā)生疾病的一般治療效果較差，關鍵是大群的預防。
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