?布魯菌血培養(yǎng)儀結(jié)果及生長(zhǎng)曲線特點(diǎn)研究
布魯菌是一種動(dòng)物源性人畜共患病病原菌，可引起布魯菌病。臨床表現(xiàn)為多汗、反復(fù)發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛、肝脾腫大。人類對(duì)布魯菌普遍易感。布魯菌病以皮膚接觸感染為主，是牧業(yè)人員和某些職業(yè)人群感染布魯菌的主要途徑；其次，飲用生乳和食入污染布魯菌的食物而發(fā)生消化道傳染。臨床布魯菌主要分離自血液，由于此菌臨床分離較少，關(guān)于該菌在Bact／Alert血培養(yǎng)儀上生長(zhǎng)曲線特點(diǎn)的研究極少見(jiàn)。
本院于2011年4月—2013年1月從15例患者血液中分離出15株布魯菌，通過(guò)觀察布魯菌在Bact／Alert血培養(yǎng)儀上生長(zhǎng)曲線特點(diǎn)，可幫助我們預(yù)測(cè)該菌株生長(zhǎng)，協(xié)助臨床快速診斷布魯菌病。實(shí)驗(yàn)室對(duì)布魯菌病的診斷有重要作用，從發(fā)熱布魯菌病患者的血液中或慢性感染患者的組織（如骨髓）中分離布魯菌是診斷該病的金標(biāo)準(zhǔn)。
結(jié)果
絕大多數(shù)細(xì)菌是以二分裂方式繁殖，所以可以將生長(zhǎng)和繁殖的整個(gè)過(guò)程分為遲緩期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期和穩(wěn)定期。繁殖速度快的菌種一般遲緩期較短，繁殖速度慢的菌種一般遲緩期較長(zhǎng)。圖1a為本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)出金葡菌生長(zhǎng)曲線，葡萄球菌屬細(xì)菌生長(zhǎng)期曲線有一定的傾斜可見(jiàn)遲緩期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期及穩(wěn)定期3個(gè)階段，生長(zhǎng)期曲線角度較大；圖1b是本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)出布魯菌生長(zhǎng)曲線，布魯菌遲緩期曲線較平坦，3 d左右陽(yáng)性報(bào)警，生長(zhǎng)期曲線短，穩(wěn)定期曲線平坦；圖1c是本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)出大腸埃希菌生長(zhǎng)曲線，腸桿菌科細(xì)菌遲緩期較短，生長(zhǎng)期生長(zhǎng)迅速，甚至無(wú)穩(wěn)定期。
圖1血培養(yǎng)葡萄球菌、布魯菌、腸桿菌科細(xì)菌生長(zhǎng)曲線
討論
布魯菌的生長(zhǎng)曲線不同于腸桿菌科細(xì)菌、葡萄球菌，與不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌生長(zhǎng)曲線相同。李新等［6］報(bào)道，不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌在血培養(yǎng)儀上生長(zhǎng)曲線的特點(diǎn)是：生長(zhǎng)期所對(duì)應(yīng)的縱軸較短，遲緩期和穩(wěn)定期曲線較平坦，陽(yáng)性報(bào)警時(shí)間均值18.8 h。陳日榮等［7］觀察腸桿菌科細(xì)菌、葡萄球菌、不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌、鏈球菌屬細(xì)菌、腸球菌屬細(xì)菌及真菌的生長(zhǎng)曲線，結(jié)果與李新等報(bào)道的相同，陽(yáng)性報(bào)警時(shí)間均小于24 h。本院分離的15株布魯菌在Bact／Alert 3D血培養(yǎng)儀上的生長(zhǎng)曲線與不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌的特點(diǎn)相同，陽(yáng)性報(bào)警時(shí)間均值63.9 h，只有1株菌在36 h出現(xiàn)生長(zhǎng)期，較其他14株菌生長(zhǎng)期出現(xiàn)早。由此可見(jiàn)布魯菌的生長(zhǎng)曲線特點(diǎn)雖然與不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌相同，但陽(yáng)性報(bào)警時(shí)間較晚。有研究表明，在布魯菌流行地區(qū)使用血培養(yǎng)儀監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，大部分布魯菌在3 d內(nèi)可獲得陽(yáng)性結(jié)果［8］。內(nèi)蒙古自治區(qū)是布魯菌病流行地區(qū)，本研究中15株布魯菌均在3 d左右檢出。如出現(xiàn)上述生長(zhǎng)曲線時(shí)，應(yīng)高度懷疑為布魯菌，后續(xù)的操作都應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，轉(zhuǎn)種的平皿要延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，因大多數(shù)布魯菌在血平皿及巧克力平皿上需要48～72 h以上才能生長(zhǎng)出肉眼可見(jiàn)的菌落。注射器抽取血培養(yǎng)瓶中液體直接進(jìn)行尿素水解試驗(yàn)，結(jié)合涂片革蘭染色細(xì)菌形態(tài)特點(diǎn)或柯氏染色可以提示布魯菌生長(zhǎng)，比從平皿選取菌落進(jìn)行上述試驗(yàn)提前24～48 h。
用布魯菌診斷血清即可確定布魯菌，但不能鑒定到種。在選用治療藥物時(shí)可根據(jù)鑒定到屬的結(jié)果。鑒定到種和生物型水平有助于流行病學(xué)研究。通常不推薦進(jìn)行布魯菌藥物敏感試驗(yàn)，大多數(shù)布魯菌病治療失敗并非由于細(xì)菌耐藥。
布魯菌侵襲力較強(qiáng)，可以通過(guò)黏膜、完整皮膚、呼吸道感染人類，在體內(nèi)有很強(qiáng)的繁殖和擴(kuò)散能力。由于布魯菌對(duì)人有極強(qiáng)的致病力，常可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室獲得性感染，被認(rèn)為是潛在的生物恐怖病原菌，氣溶膠是實(shí)驗(yàn)室獲得性感染的主要原因。實(shí)驗(yàn)室感染可能與未在生物安全柜內(nèi)處理陽(yáng)性血培養(yǎng)標(biāo)本有關(guān)。國(guó)外文獻(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室暴發(fā)感染的相關(guān)報(bào)道。我國(guó)近年也有實(shí)驗(yàn)室感染布魯菌的相關(guān)報(bào)道。因此，必須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程，處理感染性材料時(shí)，特別是處理布魯菌等具有高度傳染性的標(biāo)本時(shí)，需要在3級(jí)生物安全防護(hù)下進(jìn)行操作。實(shí)驗(yàn)室工作者應(yīng)認(rèn)識(shí)到氣溶膠傳播的危險(xiǎn)，適當(dāng)使用生物安全防護(hù)，降低實(shí)驗(yàn)室獲得性感染的風(fēng)險(xiǎn)。
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